បរិស្ថានវប្បធម៌កោសិកាប៉ះពាល់ដល់ការផលិតកោសិកា

គុណសម្បត្តិចម្បងមួយនៃវប្បធម៌កោសិកាគឺសមត្ថភាពក្នុងការរៀបចំគីមីសាស្ត្រនៃការបង្កើតឡើងវិញកោសិកា (ពោលគឺសីតុណ្ហភាព pH សម្ពាធ osmotic ភាពតានតឹង O2 និង CO2) និងបរិយាកាសសរីរវិទ្យា (ពោលគឺការប្រមូលផ្តុំអរម៉ូន និងសារធាតុចិញ្ចឹម)។បន្ថែមពីលើសីតុណ្ហភាព បរិយាកាសវប្បធម៌ត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយឧបករណ៍ផ្ទុកកំណើន។

ទោះបីជាបរិយាកាសសរីរវិទ្យានៃវប្បធម៌មិនមានភាពច្បាស់លាស់ដូចបរិយាកាសរូបវិទ្យា និងគីមីក៏ដោយ ការយល់ដឹងកាន់តែច្បាស់អំពីសមាសធាតុសេរ៉ូម ការកំណត់អត្តសញ្ញាណកត្តាលូតលាស់ដែលត្រូវការសម្រាប់ការរីកសាយ និងការយល់ដឹងកាន់តែច្បាស់អំពីមីក្រូបរិស្ថាននៃកោសិកានៅក្នុងវប្បធម៌។(ពោលគឺអន្តរកម្មកោសិកា-កោសិកា ការសាយភាយឧស្ម័ន អន្តរកម្មជាមួយម៉ាទ្រីស) ឥឡូវនេះអនុញ្ញាតឱ្យខ្សែកោសិកាមួយចំនួនត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយដែលគ្មានសេរ៉ូម។

1. បរិយាកាសវប្បធម៌ប៉ះពាល់ដល់ការលូតលាស់កោសិកា
សូមចំណាំថាលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌កោសិកាគឺខុសគ្នាសម្រាប់ប្រភេទកោសិកានីមួយៗ។
ផលវិបាកនៃការងាកចេញពីលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ដែលត្រូវការសម្រាប់ប្រភេទកោសិកាជាក់លាក់មួយមានចាប់ពីការបង្ហាញនៃ phenotypes មិនធម្មតា រហូតដល់ការបរាជ័យពេញលេញនៃវប្បធម៌កោសិកា។ដូច្នេះហើយ យើងសូមណែនាំអ្នកឱ្យស្គាល់បន្ទាត់កោសិកាដែលអ្នកចាប់អារម្មណ៍ និងធ្វើតាមការណែនាំដែលបានផ្តល់សម្រាប់ផលិតផលនីមួយៗដែលអ្នកប្រើនៅក្នុងការពិសោធន៍របស់អ្នក។

2. ការប្រុងប្រយ័ត្នសម្រាប់ការបង្កើតបរិយាកាសវប្បធម៌កោសិកាដែលប្រសើរឡើងសម្រាប់កោសិការបស់អ្នក៖
ប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ និងសេរ៉ូម (សូមមើលខាងក្រោមសម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែម)
កម្រិត pH និង CO2 (សូមមើលខាងក្រោមសម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែម)
ការដាំដុះផ្លាស្ទិច (សូមមើលខាងក្រោមសម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែម)
សីតុណ្ហភាព (សូមមើលខាងក្រោមសម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែម)

2.1 ប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ និងសេរ៉ូម
ឧបករណ៍ផ្ទុកវប្បធម៌គឺជាផ្នែកសំខាន់បំផុតនៃបរិយាកាសវប្បធម៌ ព្រោះវាផ្តល់នូវសារធាតុចិញ្ចឹម កត្តាលូតលាស់ និងអរម៉ូនដែលត្រូវការសម្រាប់ការលូតលាស់កោសិកា និងគ្រប់គ្រង pH និងសម្ពាធ osmotic នៃវប្បធម៌។

ទោះបីជាការពិសោធន៍វប្បធម៌កោសិកាដំបូងត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយធម្មជាតិដែលទទួលបានពីសារធាតុចម្រាញ់ពីជាលិកា និងសារធាតុរាវក្នុងខ្លួនក៏ដោយ តម្រូវការសម្រាប់ស្តង់ដារ គុណភាពមេឌៀ និងតម្រូវការកើនឡើងនាំឱ្យបង្កើតប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយច្បាស់លាស់។ប្រភេទមេឌៀមូលដ្ឋានទាំងបីគឺ មេឌៀមូលដ្ឋាន មេឌៀសេរ៉ូមកាត់បន្ថយ និងមេឌៀគ្មានសេរ៉ូម ហើយពួកវាមានតម្រូវការខុសៗគ្នាសម្រាប់ការបន្ថែមសេរ៉ូម។

2.1.1 ឧបករណ៍ផ្ទុកមូលដ្ឋាន
ឧបករណ៍ផ្ទុកកោសិកា Gibco
ខ្សែកោសិកាភាគច្រើនលូតលាស់បានល្អនៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយមូលដ្ឋានដែលមានអាស៊ីតអាមីណូ វីតាមីន អំបិលអសរីរាង្គ និងប្រភពកាបូន (ដូចជាគ្លុយកូស) ប៉ុន្តែទម្រង់ប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយជាមូលដ្ឋានទាំងនេះត្រូវតែបំពេញបន្ថែមដោយសេរ៉ូម។

2.1.2 កាត់បន្ថយកម្រិតមធ្យមនៃសេរ៉ូម
ដបជាមួយ Gibco Low Serum Medium
យុទ្ធសាស្ត្រមួយទៀតដើម្បីកាត់បន្ថយផលប៉ះពាល់អវិជ្ជមាននៃសេរ៉ូមក្នុងការពិសោធន៍វប្បធម៌កោសិកាគឺការប្រើប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយដែលកាត់បន្ថយសេរ៉ូម។កម្រិតមធ្យមសេរ៉ូមដែលកាត់បន្ថយគឺជារូបមន្តមធ្យមមូលដ្ឋានដែលសម្បូរទៅដោយសារធាតុចិញ្ចឹម និងកត្តាមកពីសត្វ ដែលអាចកាត់បន្ថយបរិមាណនៃសេរ៉ូមដែលត្រូវការ។

2.1.3 ឧបករណ៍ផ្ទុកដោយគ្មានសេរ៉ូម
ដបជាមួយឧបករណ៍ផ្ទុក Gibco គ្មានសេរ៉ូម
ឧបករណ៍ផ្ទុកដោយគ្មានសេរ៉ូម (SFM) ជៀសវាងការប្រើសេរ៉ូមសត្វដោយជំនួសសេរ៉ូមជាមួយនឹងអាហាររូបត្ថម្ភសមស្រប និងទម្រង់អ័រម៉ូន។វប្បធម៌បឋម និងខ្សែកោសិកាជាច្រើនមានរូបមន្តមធ្យមដែលមិនមានសេរ៉ូម រួមទាំងខ្សែសង្វាក់ផលិតកម្មប្រូតេអ៊ីនដែលផ្សំឡើងពី Hamster Ovary របស់ចិន (CHO) ខ្សែកោសិកា hybridoma ផ្សេងៗ បន្ទាត់សត្វល្អិត Sf9 និង Sf21 (Spodoptera frugiperda) ក៏ដូចជាសម្រាប់ម៉ាស៊ីនសម្រាប់ផលិតមេរោគ។ (ឧទាហរណ៍ 293, VERO, MDCK, MDBK) ។ល។ គុណសម្បត្តិចម្បងមួយនៃការប្រើប្រាស់ឧបករណ៍ផ្ទុកដែលមិនមានសេរ៉ូមគឺសមត្ថភាពក្នុងការជ្រើសរើសមធ្យមសម្រាប់ប្រភេទកោសិកាជាក់លាក់ដោយជ្រើសរើសបន្សំសមស្របនៃកត្តាលូតលាស់។តារាងខាងក្រោមរាយបញ្ជីគុណសម្បត្តិ និងគុណវិបត្តិនៃមេឌៀដែលគ្មានសេរ៉ូម។

អត្ថប្រយោជន៍
បង្កើនភាពច្បាស់លាស់
ការអនុវត្តកាន់តែស៊ីសង្វាក់គ្នា។
ការបន្សុតកាន់តែងាយស្រួល និងដំណើរការចុះក្រោម
វាយតម្លៃមុខងារកោសិកាយ៉ាងត្រឹមត្រូវ។
បង្កើនផលិតភាព
ការគ្រប់គ្រងកាន់តែប្រសើរឡើងនៃប្រតិកម្មសរីរវិទ្យា
ការរកឃើញប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយកោសិកាប្រសើរឡើង
គុណវិបត្តិ
ប្រភេទកោសិកា តម្រូវការរូបមន្តមធ្យមជាក់លាក់
ត្រូវការភាពបរិសុទ្ធនៃសារធាតុប្រតិកម្មខ្ពស់ជាង
ការលូតលាស់យឺត

2.2.1 កម្រិត pH
ខ្សែកោសិកាថនិកសត្វធម្មតាភាគច្រើនលូតលាស់បានល្អនៅ pH 7.4 ហើយភាពខុសគ្នារវាងខ្សែកោសិកាផ្សេងៗគ្នាគឺតូច។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ខ្សែកោសិកាដែលបានបំប្លែងមួយចំនួនត្រូវបានបង្ហាញថាមានការលូតលាស់ល្អនៅក្នុងបរិយាកាសអាសុីតបន្តិច (pH 7.0 – 7.4) ខណៈដែលខ្សែកោសិកា fibroblast ធម្មតាមួយចំនួនចូលចិត្តបរិយាកាសអាល់កាឡាំងបន្តិច (pH 7.4 – 7.7)។កោសិកាសត្វល្អិតដូចជា Sf9 និង Sf21 លូតលាស់ល្អបំផុតនៅ pH 6.2។

2.2.2 កម្រិត CO2
ឧបករណ៍ផ្ទុកលូតលាស់គ្រប់គ្រង pH នៃវប្បធម៌ និងរារាំងកោសិកាក្នុងវប្បធម៌ ដើម្បីទប់ទល់នឹងការផ្លាស់ប្តូរ pH ។ជាធម្មតា សតិបណ្ដោះអាសន្ននេះត្រូវបានសម្រេចដោយផ្ទុកសារធាតុសរីរាង្គ (ឧទាហរណ៍ HEPES) ឬសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលមានមូលដ្ឋានលើ CO2-bicarbonate ។ដោយសារតែ pH របស់ឧបករណ៍ផ្ទុកអាស្រ័យទៅលើតុល្យភាពល្អនៃកាបូនឌីអុកស៊ីតរលាយ (CO2) និងប៊ីកាបូណាត (HCO3-) ការផ្លាស់ប្តូរនៃឧស្ម័នកាបូនិកនឹងផ្លាស់ប្តូរ pH របស់ឧបករណ៍ផ្ទុក។ដូច្នេះហើយ នៅពេលប្រើឧបករណ៍ផ្ទុកមធ្យមដែលមានសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលមានមូលដ្ឋានលើ CO2 ប៊ីកាកាបូណាត ចាំបាច់ត្រូវប្រើ CO2 ខាងក្រៅ ជាពិសេសនៅពេលបណ្តុះកោសិកានៅក្នុងចានវប្បធម៌បើកចំហ ឬបណ្តុះកោសិកាផ្លាស់ប្តូរនៅកំហាប់ខ្ពស់។ទោះបីជាអ្នកស្រាវជ្រាវភាគច្រើនប្រើ 5-7% CO2 នៅក្នុងខ្យល់ក៏ដោយ ការពិសោធន៍វប្បធម៌កោសិកាភាគច្រើនជាធម្មតាប្រើ 4-10% CO2 ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ ឧបករណ៍ផ្ទុកនីមួយៗមានភាពតានតឹង CO2 និងកំហាប់ bicarbonate ដែលបានណែនាំ ដើម្បីសម្រេចបាននូវ pH និងសម្ពាធ osmotic ត្រឹមត្រូវ។សម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែម សូមមើលការណែនាំរបស់អ្នកផលិតមធ្យម។

2.3 ការដាំដុះផ្លាស្ទិច
ប្លាស្ទីកវប្បធម៌កោសិកាមានក្នុងទម្រង់ទំហំ និងផ្ទៃផ្សេងៗគ្នា ដើម្បីឱ្យសមស្របនឹងកម្មវិធីវប្បធម៌កោសិកាផ្សេងៗ។ប្រើមគ្គុទ្ទេសក៍ផ្ទៃផ្លាស្ទិចវប្បធម៌កោសិកា និងមគ្គុទ្ទេសក៍ធុងវប្បធម៌កោសិកាខាងក្រោម ដើម្បីជួយអ្នកជ្រើសរើសផ្លាស្ទិចត្រឹមត្រូវសម្រាប់កម្មវិធីវប្បធម៌កោសិការបស់អ្នក។
មើលទាំងអស់ Thermo Scientific Nunc cell culture plastics (តំណភ្ជាប់ការផ្សាយពាណិជ្ជកម្ម)

2.4 សីតុណ្ហភាព
សីតុណ្ហភាពល្អបំផុតសម្រាប់វប្បធម៌កោសិកាគឺអាស្រ័យទៅលើកម្រិតធំលើសីតុណ្ហភាពរាងកាយរបស់ម៉ាស៊ីនដែលកោសិកាត្រូវបានញែកដាច់ពីគេ ហើយក្នុងកម្រិតតិចជាងចំពោះការប្រែប្រួលសីតុណ្ហភាពនៃកាយវិភាគសាស្ត្រ (ឧទាហរណ៍ សីតុណ្ហភាពស្បែកអាចទាបជាងសាច់ដុំគ្រោងឆ្អឹង។ )សម្រាប់វប្បធម៌កោសិកា ការឡើងកំដៅខ្លាំងគឺជាបញ្ហាធ្ងន់ធ្ងរជាងការឡើងកំដៅ។ដូច្នេះសីតុណ្ហភាពនៅក្នុង incubator ត្រូវបានកំណត់ជាធម្មតាទាបជាងសីតុណ្ហភាពល្អបំផុត។

2.4.1 សីតុណ្ហភាពល្អបំផុតសម្រាប់បន្ទាត់កោសិកាផ្សេងៗ
ខ្សែកោសិកាមនុស្ស និងថនិកសត្វភាគច្រើនត្រូវបានរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 36°C ទៅ 37°C សម្រាប់ការលូតលាស់ល្អបំផុត។
កោសិកាសត្វល្អិតត្រូវបានដាំដុះនៅសីតុណ្ហភាព 27°C សម្រាប់ការលូតលាស់ល្អបំផុត។ពួកវាលូតលាស់យឺតជាងនៅសីតុណ្ហភាពទាប និងសីតុណ្ហភាពចន្លោះពី 27°C ទៅ 30°C។លើសពី 30°C ភាពរឹងមាំនៃកោសិកាសត្វល្អិតថយចុះ ទោះបីជាវាត្រលប់ទៅ 27°C ក៏ដោយ ក៏កោសិកានឹងមិនងើបឡើងវិញដែរ។
ខ្សែកោសិកាសត្វស្លាបត្រូវការ 38.5°C ដើម្បីឈានដល់ការលូតលាស់អតិបរមា។ទោះបីជាកោសិកាទាំងនេះអាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 37 អង្សារក៏ដោយ ពួកវានឹងលូតលាស់យឺតជាង។
ខ្សែកោសិកាដែលកើតចេញពីសត្វឈាមត្រជាក់ (ដូចជា amphibians ត្រីទឹកត្រជាក់) អាចទ្រាំនឹងសីតុណ្ហភាពធំទូលាយពី 15°C ទៅ 26°C។